Datentabelle

Hier finden Sie eine detaillierte Tabelle mit den wichtigsten Eigenschaften aller ATTO-Farbstoffe.

Datentabelle (23.03.2020) 

Alle spektralen Daten wurden in wässriger Lösung (PBS, pH 7.4) bei 22 °C bestimmt und beziehen sich auf die Farbstoffe mit freier Carboxylgruppe. Wenn eine Tendenz zur Aggregation bestand wurden die Farbstofflösungen hinreichend verdünnt, sodass das Absorptionsspektrum des Farbstoffmonomers vorlag. Obwohl man es bei den meisten Anwendungen im Bereich der Lebenswissenschaften mit wässrigen Lösungen zu tun hat, sollte an dieser Stelle dennoch darauf hingewiesen werden, dass die optischen Eigenschaften von Farbstoffen, insbesondere die Fluoreszenzeffizienz (Fluoreszenzquantenausbeute) sowie die Fluoreszenzlebensdauer (Fluoreszenzabklingzeit), neben anderen Faktoren wie Temperatur, Viskosität etc., vom Lösungsmittel abhängen kann.
Für die meisten ATTO-Farbstoffe ist dieser Einfluss jedoch sehr gering.
Darüber hinaus hängen die optischen Eigenschaften eines Fluoreszenzfarbstoffs vom Derivat (Carboxy, NHS-Ester etc.) ab. Beispielsweise sind Fluoreszenzquantenausbeute und Fluoreszenzlebensdauer des Farbstoff-Maleimids im Vergleich zur Farbstoffsäure (Carboxy) deutlich reduziert. Dies ist jedoch insofern nicht von Bedeutung, da die Fluoreszenz nach erfolgter Kopplung des Farbstoffmaleimids an ein Biomolekül, wie beispielsweise einem Protein, wiederhergestellt ist.

Die Tabelle beinhaltet die Molekulargewichte (MW) der am häufigsten verwendeten Derivate NHS-Ester und Maleimid zur Kopplung an Amino- bzw. Thiolgruppen. In den Molekulargewichten sind die Gegenionen inkludiert. Zur Hilfestellung bei der MS-Analyse von Biomolekül-Farbstoff-Konjugaten wird darüber hinaus die jeweilige Massen- und Ladungszunahme für jeden ATTO-Farbstoff nach der Kopplung angegeben. Da Biomoleküle wie auch Fluoreszenzfarbstoffe basische (-NH₂) oder saure (-COOH, -SO₃H) Substituenten tragen können, ist sowohl die Masse als auch die Ladung abhängig vom pH-Wert. Die Angaben in der Tabelle basieren auf der Annahme, dass Aminogruppen (-NH₂) unprotoniert, Säuregruppen (-COOH, -SO₃H) deprotoniert und Thiolgruppen (-SH) neutral  vorliegen. Dies entspricht einer wässrigen Lösung mit einem nahezu neutralen pH-Wert (pH 6-8).
Es sei an dieser Stelle darauf hingewiesen, dass unter saureren Bedingungen (pH < 4) die zusätzliche Carbonsäuregruppe in den Fluoreszenzfarbstoffen ATTO 565 und ATTO 590 protoniert vorliegt und somit Masse und Ladung um 1 höher sind, als in der Tabelle angegeben.

Die CF-Werte bei den Wellenlängen 280 nm bzw. 260 nm werden zur Bestimmung des Markierungsgrades (Degree of Labeling, DOL) von Biomolekülen wie beispielsweise Antikörpern benötigt und dienen zur Korrektur des Absorptionsanteils des jeweiligen Fluoreszenzfarbstoffs im Farbstoffkonjugat. Im Falle der Markierung von Proteinen ist der Korrekturfaktor CF₂₈₀ zu verwenden, beim Labeling von Oligonukleotiden CF₂₆₀.